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产品名称:NANOLAB 3D Gel™即用型 3D细胞培养水凝胶

产品型号:3D Gel /3D Gel-RGD

产品特点:NANOLAB 3D Gel™即用型 3D细胞培养水凝胶,为无动物源性多糖水凝胶体系,模仿天然细胞外基质(ECM) 环境。水凝胶为即用型中性 pH 溶液,室温即可稳定保存。

3D Gel /3D Gel-RGDNANOLAB 3D Gel™即用型 3D细胞培养水凝胶的详细资料:

NANOLAB  3D Gel™即用型 3D细胞培养水凝胶

产品介绍:

即用型 3D 细胞培养水凝胶

产品描述和规格

3D Gel™ 为无动物源性多糖水凝胶体系,模仿天然细胞外基质(ECM) 环境。水凝胶为即用型中性 pH 溶液,室温即可稳定保存。使用时,只需与细

胞培养基混合即可形成水凝胶基质。水凝胶颜色透明,具有可渗透性,相容 于多种细胞成像系统。培养在水凝胶系统的细胞可在试验后轻松收获,水凝 胶也可注射,非常适合体内研究。3D Gel 为细胞创造一个具功能性且优 化的环境,让细胞感觉在家一样。从 2D 凝胶培养,3D 细胞培养到动物注射, 3D Gel 提供一个可以同时适用于体外研究与活体实验的共通操作平台。 TheWell 有两种水凝胶系统:

3D Gel – 适用于悬浮细胞系

3D Gel-RGD(RGD 肽修饰的 3D Gel)– 适用于贴壁细胞

应用说明:

产品:          3D Gel (Cat#: NANO001)

                3DGel-RGD (Cat#: NANO002)

仅供科研用途,不得用于诊断过程。

3D细胞培养

(可注射水凝胶制备)

材料:

3D Gel,细胞培养基,微量移液器或注射器,细胞培养孔板,细胞, 37 ˚C 水浴

方法:

1.     在 37˚C 预热 3D Gel 溶液和细胞培养基。

2. 向 4mL 3D Gel 溶液中加入 1mL 细胞悬液,使用微量移液器(或 快速涡旋振荡)轻轻混匀,尽量不要产生气泡。对于水凝胶注射:混合 物可转移到注射器,水凝胶在稳定 15-30 分钟后即可用于注射。)

3.     将水凝胶混合液转移至细胞培养孔板。

倾斜/旋转培养板,以确保水凝胶在培养板上包被均匀。

不同细胞板的推荐体积如下表:

4.     等待 15 分钟至水凝胶稳定。

5.     小心加入细胞培养基以覆盖水凝胶溶液。

6.    将细胞培养板加入培养箱,每 48 小时换液

注:

l       预热 3D Gel 溶液有助于降低溶液粘度。

l       最终细胞浓度可根据不同细胞类型调整。我们推荐 2×105 to 1×106

2D 凝胶培养                                                                                                              

材料:

3D Gel,细胞培养基或 PBS,微量移液器,细胞培养孔板,细胞,37 ˚C 水浴

方法:

1.     在 37 ˚C 预热 3D Gel 溶液和细胞培养基。

2.     向 4mL VitroGel  3D 溶液中加入 1mL 细胞培养基(或 PBS),使用微量 移液器(或快速涡旋振荡)轻轻混匀,尽量不要产生气泡。

3.     将水凝胶混合液转移至细胞培养孔板。

注:倾斜/旋转培养板,以确保水凝胶在培养板上包被均匀。

4.     等待 15 分钟至水凝胶稳定。

5.     吸出多余液体,小心将细胞加到水凝胶顶部。

6.     将细胞培养板加入培养箱,每 48 小时换液。

注:

l       预热 3D Gel 溶液有助于降低溶液粘度。

l       最终细胞浓度可根据不同细胞类型调整。

 

NANOLAB  3D Gel™即用型 3D细胞培养水凝胶

初次使用说明

(请在使用产品前仔细阅读)

请根据不同的细胞系和培养基组分优化 VitroGel  3D 水凝胶系统,以得到更

的结果。初次使用用户,强烈建议培养不同的细胞系时,都进行水凝胶浓 度梯度测试。

 

请参照以下步骤设置水凝胶浓度梯度:

1.     稀释:可通过稀释水凝胶溶液调节最终水凝胶强度:直接将水凝胶溶液 与去离子水或 0.1X PBS(不含钙或镁离子)以 1:0-1:5(水凝胶溶液: 去离子水,v/v)室温混合。(最终胶强度 1:0 > 1:1 > 1:2 > 1:3 > 1:4 > 1:5)

2.     成胶:稀释的水凝胶溶液和细胞培养基不同的混合比例会影响成胶速度 及最终的胶强度。推荐的混合比例为 4:1-1:3(稀释的水凝胶:细胞培养 基,  v/v)。

l       相同稀释度的水凝胶溶液,添加越多细胞培养基,成胶越快。 对于稀释度较高的水凝胶溶液(eg. 1:3, 1:4 or 1:5),请使用较多 的细胞培养液混合,以确保水凝胶在合理的时间内成胶。

l       不同细胞培养基的推荐混合比例,请参考下表。

 

活/死细胞分析                                                                                        

材料:

培养于 3D Gel 系统中的细胞,活/死细胞染色液,PBS,微量移液器, 荧光显微镜

方法:

1.     移去覆盖于水凝胶之上的细胞培养基,并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。

2.     用 PBS 制备 5X 活/死细胞染色溶液

3.     将活/死细胞染色溶液直接加入到水凝胶中并淹没整个凝胶。推荐体积如 下表:

4.     在黑暗中孵育 5 分钟,在荧光显微镜下观察。

注:

l    推荐使用 5X 染色液作为起始浓度。可基于不同细胞系和成像系统优化 更佳浓度。

l    细胞染色后应尽快分析

 

细胞收获

材料:

培养于 3D Gel 系统中的细胞,0.1XPBS 或去离子水,离心管,微量移

液器,37˚C 水浴,漩涡震荡仪

方法:(使用 24 孔板,250μL 胶/孔为例)

1.     在 37℃水浴预热 0.1X PBS(或去离子水)及空的离心管。

2.     由培养箱取出细胞培养板,弃掉覆盖于水凝胶顶部的培养基。

3.     每孔加入 1 mL 预热的 0.1X PBS,并上下吹打以彻底混匀。

4.     将混合物加入预热的离心管。

5.     用 1 mL 预热的 0.1X PBS 润洗每个孔,并加入离心管中。

6.     上下吹打,充分混匀,并加入预热的 0.1X PBS 至 10mL。

7.     将离心管漩涡震荡 5-10 秒,并在 37℃水浴放置 1-5 分钟(可选)。

8.     1,000 rpm 离心 2-5 分钟,弃上清,收集细胞沉淀。

9.     用预热的 0.1X PBS 重悬细胞,如果需要可重复 6-8 步骤一次(可选)。

注:

l       使用预热的 0.1X  PBS 或去离子水,不要使用冷的溶液或 1X PBS(或 高离子浓度的细胞培养基)。

l       根据不同细胞系优化离心的速度和时间。

 

荧光染色:

材料:

培养于 3D Gel 系统中的细胞,PBS,微量移液器,固定液(4%甲醛 PBS 溶液),渗透液(0.1% Triton X-100 PBS 溶液),肌动蛋白抑制剂染色液,细 胞核染色液,微量移液管,荧光显微镜。

 

方法:

1.     移去覆盖于水凝胶之上的细胞培养基,并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。

2.     将固定液加入水凝胶中,并在室温孵育 30 分钟。

3.     弃去固定液,并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。

4.     加入渗透液并淹没整个凝胶,置于室温 5 分钟。

5.     弃去渗透液,并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。

6.     加入肌动蛋白抑制剂染色液,室温,黑暗孵育 1 小时。

7.   弃去肌动蛋白抑制剂染色液,并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。

8.     加入细胞核染色液,室温,黑暗孵育 5 分钟。

9.     弃去细胞核染色液并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。

10.   荧光显微镜下观察。

注:

l       根据产品使用说明配制染色液。可根据不同细胞系和水凝胶调节染色液 最终浓度。

l       在清洗步骤中,小心添加或移除溶液,以避免损失水凝胶/细胞。

l       孵育时间可根据不同细胞系调整。

l       水凝胶加入染色液后,应避免光照。

l       确保 PBS 冲洗步骤彻底,同时水凝胶在整个过程中都需要溶液覆盖。

 

组织学分析:

材料:

培养于 3D Gel 系统中的细胞,PBS,卡夹,石蜡,二甲苯,固定液(10% 福尔马林),乙醇(50-100%)

方法:

1.     移去覆盖于水凝胶之上的细胞培养基,并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次

2.     将固定液加入水凝胶中,并在室温孵育 30 分钟。

3.     弃去固定液,并用 PBS 冲洗水凝胶 3 次。

4.     将水凝胶放于卡夹中,用乙醇,按照以下顺序脱水:

50%(10 分钟) - 70%(10 分钟) - 80%(10 分钟) - 95%(10 分钟) - 100%(10 分钟) - 100%(10 分钟) - 100%(10  分钟)。

5.     将乙醇换为二甲苯,按照以下顺序脱水:

65%乙醇:35%二甲苯(10-15 分钟)-50%乙醇+50%二甲苯(10-15 分钟)- 35%乙醇+65%二甲苯(10-15 分钟) - 100%二甲苯(10-15 分钟) - 100%二甲苯(10-15 分钟) - 100%二甲苯(10 分钟)

6.     将二甲苯换为石蜡,按照以下顺序:

65%二甲苯+35%石蜡(30  分钟)  -  50%二甲苯+50%石蜡(30 分钟) -

35%二甲苯+65%石蜡(30 分钟) - 100% 石蜡 (1-2 小时) - 100% 石 蜡(1-2 小时或过夜)

7.     嵌入新鲜的石蜡中后,切片,放于显微镜载玻片上。

8.     根据不同的应用进行染色和组装。

 

注:

l    根据不同细胞系和水凝胶大小优化孵育时间。确保水凝胶在整个过程中 都被溶液覆盖。

 

 

表 B:不同细胞的推荐稀释比例和混合比例

 如果你对3D Gel /3D Gel-RGDNANOLAB 3D Gel™即用型 3D细胞培养水凝胶感兴趣,想了解更详细的产品信息,填写下表直接与厂家联系:

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